2×高保真长片段快速PCR预混液(含染料)-PCR/RT-PCR/qPCR-试剂-生物在线
上海魔兜儿生物科技有限公司
2×高保真长片段快速PCR预混液(含染料)

2×高保真长片段快速PCR预混液(含染料)

商家询价

产品名称: 2×高保真长片段快速PCR预混液(含染料)

英文名称: 2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)

产品编号: N132017

产品价格: null

产品产地: 美国

品牌商标: Arcegen

更新时间: 2025-07-11T09:42:51

使用范围: null

规格 价格
250 μL 100.0
1ml 480.0
5×1 mL 1600.0
上海魔兜儿生物科技有限公司
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产品简介

2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液,包含High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系,预混液中含有预先添加的电泳指示剂,PCR产物可直接进行电泳,扩增产物为平末端,延伸速度为10 sec/kb。其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA 聚合酶的9倍,适用于复杂模板扩增。2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品信息

货号

N132017E

N132017S

N132017M

规格

250 μL

1 mL

5×1 mL

储存条件

-25~-15℃保存,有效期1年。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于科研。

使用说明

1,冰上融化试剂 ,混匀后备用。

2,冰上配制表 1 中的 PCR 扩增反应液。配制完成后充分混匀离心。

3,若模板为粗提样本 ,建议添加体积不超过反应体系的 5%。

表1. PCR 扩增反应体系

组分

体积  (µL)

模板(10~200ng)

x

正向引物(10  μM)*

2

反向引物(10  μM)*

2

2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)

25

ddH2O

Up to 50

*PCR 反应体系中引物终浓度范围0.4~1μM,引物终浓度过低,会影响扩增效果,若扩增效果不理想,可适当提高引物添加量,提升检出率。

4,将PCR管转移到PCR仪根据表2进行片段扩增。

5,推荐PCR扩增程序

表2. PCR 扩增反应程序

温度

时间

循环数

98°C

30 sec

1

98°C

10 sec

30-35(根据实验要求)

60°C*

5 sec

68°C~72°C**

5~10 sec/kb

72°C

2 min

1

4°C

Hold

-

*退火温度推荐60°C,也可根据需要,设立温度梯度摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间为5 sec ,可以在5-20 sec 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

**延伸温度和时间:10 kb以上长片段或较高GC片段扩增,推荐使用68°C,10 kb及10 kb以下片段且gc在40%~60%的片段扩增,可以尝试72℃延伸。当扩增效果不理想时,延伸速率根据实际结果可在5 sec/kb~10 sec/kb之间进行调整,扩增片段<10 kb时,延伸速率可选择5 sec/kb,当扩增片段≥10 kb时,延伸速率可选10 sec/kb。

6,吸取 5~8 µL 扩增产物,用1%的琼脂糖凝胶进行电泳,检测是否扩增出正确条带。

应用示例

1,Overlap PCR

1)扩增子1、扩增子2制备

表3. PCR反应体系配制(50 μL体系)

组分

使用量

2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)

25 μL

模板 1 DNA、模板 2 DNA

10~100 ng

一轮引物 F1(10  μM)、一轮引物 F2(10  μM)

2 μL

一轮引物 R1(10  μM)、一轮引物 R2(10  μM)

2 μL

ddH2O

To 50 μL

表4.一轮PCR程序

温度

时间

循环数

98°C

30 sec

1

98°C

10 sec

30-35(根据实验要求)

60°C

5 sec

72°C

10 sec/kb

72°C

2 min

1

4°C

Hold

-

2)Overlap PCR(两扩增子融合)

表5.二轮PCR反应体系配制(50 μL体系)

组分

使用量

2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)

25 μL

一轮扩增产物1(扩增子1)

2~4μL

一轮扩增产物1(扩增子2)

2μL

一轮引物F1(10 μM)

2μL

一轮引物R2(10 μM)

2 μL

ddH2O

To 50 μL

表6.二轮PCR程序设置(与一轮程序相同)

温度

时间

循环数

98°C

30 sec

1

98°C

10 sec

30-35(根据实验要求)

60°C

5 sec

72°C

10 sec/kb

72°C

2 min

1

4°C

Hold

-

【注】若Overlap产物杂带较多,可以考虑将一轮扩增产物(扩增子1、扩增子2)纯化后,再做二轮扩增。

2,质粒扩增

表7 .PCR 反应体系配制(50 μL体系)

组分

使用量

2×High-Fidelity Long PCR Master Mix (With Dye)

25 μL

pCAMBIA2301

10~100 ng

正向引物 F(10 μM)

2 μL

反向引物 R(10 μM)

2 μL

ddH2O

To 50 μL

表8.PCR程序设置

温度

时间

循环数

98°C

3 min

1

98°C

10 sec*

30-40(根据实验要求)

60°C**

5 sec

72°C***

10 sec/kb

72°C

2 min

1

4°C

Hold

-

*若质粒为结构紧密的超螺旋,可以适当延长变性时间。

**退火温度推荐使用60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度,当产量低时可下调退火温度,当产物特异性差时,则上调退火温度。推荐退火时间为5 sec,可以在5-20 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

***延伸温度和时间:10 kb以上长片段或较高GC片段扩增,推荐使用68°C,10 kb及10 kb以下片段且gc在40%~60%的片段扩增,可以尝试72℃延伸。当扩增效果不理想时,延伸速率根据实际结果可在5 sec/kb~10 sec/kb之间进行调整,扩增片段<10 kb时,延伸时间可选5 sec,当扩增片段≥10 kb时,延伸速率可选10 sec/kb。